CUENTA DE PLAQUETAS CON CÁMARA DE NEUBAUER

OBJETIVO

Saber hacer la cuenta de plaqutas por medio de la camara de neubauer.

FUNDAMENTO

Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.

Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático.

El líquido diluyente puede ser una solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C) o puede ser también oxalato de amonio al 1%. El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo.

SUSTANCIAS v  Alcohol al 70% v  Sangre venosa v  Diluyente de plaquetas

MATERIAL

v  Pipeta de Thoma para glóbulos

v  Equipo para venopuncion

v  Tubos de ensayo

v  Papel parafilm

v  Cámara de Neubauer

v  Cubrehematimetro

v  Microscopio

v  Gasas

v  Caja de Petri

v  Papel filtro

PROCEDIMIENTO

1.    se obtiene sangre , en un tubo con anticoagulante EDTA

2.    se absorve sangre en la pipeta de thoma hasta la marca 1.0.y se Limpiar la punta con una gasa

4.    se absorve liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (

5.    se tapan  los extremos de la pepeta con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6.    Colocar el cubrehematímetro  sobre la camra de neubauer

7.    Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad,

8.    Colocar la cámara de Neubauer  ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos

9.    Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos  rojos) las plaquetas  que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes

OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 40x Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayoría u ovalada.

RESULTADOS

por el factor de dilución  de la siguiente manera:
N° de plaquetas x mm³ = No. De plaquetas contadas X dilución X 10
Dilución: 1:100 
Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm³ ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm³
El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm³

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000

Bibliografía:

·      :http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicos-y-citologicos.html

·          http://www.americalab.net/acerca-de-las-pruebas/recuento-de-plaquetas.html

·         Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática.CBTis199, México, 

CUENTA DE LEUCOCITOS

OBJETIVO

Saber realizar el recuento de leucocitos que hay en un milimetro cubico de la sangre.

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FUNDAMENTO

Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas. Hacemos lo mismo que para los hematies pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza el líquidos de Turck. El líquido de Turck es hipotónico de modo que se destruyen los hematies y así no entorpecen en el recuento. El líquido de Turck consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.

Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.

Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:

·          Dilución de la sangre

·          Muestreo de la sangre diluida en un volumen

·          Recuento de células en ese volumen

Cálculos

En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematies hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematies. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás.

SUSTANCIAS v   Alcohol al 70%   v   Sangre venosa v   Liquido de Turk

               MATERIAL

v   Pipeta de Thoma para glóbulos blancos

v   Equipo para venopuncion

v   Boquilla blanca

v   Tubo de goma

v   Tubos de ensayo

v   Papel parafilm

v   Cámara de Neubauer

v   Cubrehematimetro

v   Microscopio

                   v   Gasas

PROCEDIMIENTO

1.   Se realiza una venopuncion  y la sangre se deposita en tubo lila con EDTA

2.    Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.    Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.

4.    Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente liquido de Turk y absorber hasta la marca 11

5.    Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y rotar manualmente de 2-3 minutos

6.    Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.

7.    Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas , luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que se  llene

8.    Dejar 3 minutos  que los leucocitos se sedimenten

9.    Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar  en los 4 cuadrados angulares.

10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 40x En la foto se observa los cuadro pequeños  donde se tiene que contar los leucocitos

RESULTADOS

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:

N° de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área 

N° de leucocitos x mm³ = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000

N° de leucocitos x mm³ = 4/200 = 1/50

N° de leucocitos x mm³ = N° de leucocitos contados x 50

EL TOTAL DE LEUCOCITOS QUE CONTAMOS FUE DE  111 POR 50 NOS DIO UN TOTAL DE  5 550/mm³

Leucocitos: Consideramos como valores normales: de 5.000 a 10.000 x mm³ de sangre.

CONCUCION

ESTA PRACTICA ES UTILI PARA SABER EL NUMERO DE LEUCOCITOS QUE SE TIENE EN LA SANGRE AUN QUE PUEDE HABER ERRORES AL CONTAR

Mujeres:	3.9-5.6 millones/µl
Hombres:	4.5-6.5 millones/µ

El rang

la practica fue echa el dia 19 de marzo del 2012

 las fuentes de consulta fueron las siguientes 

http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicos-y-citologicos.html

http://html.rincondelvago.com/recuento-de-leucocitos.html